Article Annexe II de l'Arrêté du 5 avril 1971 relatif aux méthodes officielles d'analyse des cosmétiques et produits de beauté

I. - Objet.
La présente méthode est utilisée pour l'évaluation de l'irritation oculaire par un produit cosmétique ou d'hygiène corporelle.
On considère généralement comme inutile d'effectuer l'essai avec des produits très alcalins (pH + 11,5) ou très acides (pH , 2) en raison de leurs propriétés corrosives probables.
II. - Principe.
La méthode est fondée sur l'observation des réactions oculaires provoquées par l'instillation unique du produit.
III. - Animaux de laboratoire et équipement.
3.1. Lapins albinos, de souche définie, de même sexe et pesant 2,5 kg environ.
Les animaux doivent avoir séjourné dans l'animalerie, en cage individuelle, une semaine au minimum afin d'être parfaitement acclimatés et reçoivent, dès leur arrivée, une alimentation de composition constante et équilibrée.
3.2 Dispositif de maintien permettant la bonne réalisation du protocole expérimental.
3.3. Seringue stérile de 1 ml graduée au centième.
3.4. Solution aqueuse de fluorescéine sodique à 2 p. 100 m/v, de préférence préparée extemporanément.
3.5. Solution de chlorure de sodium à 9 p. 1000 m/v, ou isotonique aux larmes ou solution équivalente.
3.6. Lampe torche.
3.7. Ophtalmoscope.
3.8. Lampe loupe U.V. de type utilisé en ophtalmologie.
3.9. Balance de laboratoire sensible au moins au milligramme pour la pesée du produit.
IV. - Mode opératoire.
Cet essai doit être effectué sur trois lapins ayant les yeux sains et sans défaut.
4.1. Appliquer directement le produit dans le sac conjonctival de l'un des yeux de chaque lapin à raison de :
Produits liquides : 0,1 ml ;
Produits semi-liquides et pâteux : 0,1 ml ou 100 mg ;
Produits solides et pulvérulents : 100 mg ou le volume de 0,1 ml dans le cas de poudres de faible densité.
4.2. Maintenir les paupières fermées pendant 10 secondes, afin d'éviter toute perte.
4.3. Maintenir les animaux pendant une heure dans le dispositif (3.2) afin qu'ils ne puissent pas se frotter l'oeil, puis les remettre dans leur cage.
4.4. Observer l'oeil des lapins une heure, puis un, deux, trois, quatre et sept jours après l'instillation, en utilisant l'oeil non instillé comme témoin pour évaluer une irritation éventuelle de l'oeil traité.
Effectuer les examens dans l'ordre suivant :
- conjonctive (chemosis, larmoiement, rougissement) ;
- iris ;
- cornée (degré et surface d'opacification).
L'observation des lésions de la conjonctive, de l'iris et de la cornée se fera par examen direct (3.6 et 3.7). L'observation de la cornée sera complétée (à l'exclusion de la lecture à une heure) par un examen après instillation de la solution de fluorescéine (3.4) et rinçage à l'aide de la solution (3.5). Elle sera poursuivie en utilisant la lampe U.V. (3.8).
4.5. Les animaux morts en cours d'essai seront remplacés par d'autres animaux qui seront traités dans les mêmes conditions.
V. - Notation.
5.1. Procéder aux différents temps à l'évaluation des lésions dans l'ordre d'instillation des animaux.
5.2. Noter les observations à l'aide de l'échelle d'évaluation numérique ci-après.
VI. - Evaluation numérique des lésions oculaires.
6.1. Conjonctive :
Commencer l'évaluation du chemosis et du larmoiement avant d'ouvrir les paupières de l'animal.
6.1.1. Chemosis (A) :
Pas de gonflement : 0.
Gonflement léger, y compris la membrane nictitante : 1.
Gonflement avec éversion de paupière : 2.
Gonflement avec paupières à demi fermées : 3.
Gonflement avec paupières fermées plus qu'à moitié ou complètement : 4.
6.1.2. Larmoiement (B) :
Absence de larmoiement : 0.
Larmoiement léger (ne pas tenir compte des légères sécrétions existant normalement dans l'angle interne) : 1.
Larmoiement avec humidification des paupières et des poils avoisinant les paupières : 2.
Larmoiement avec humidification des paupières et des poils sur de larges surfaces autour de l'oeil : 3.
6.1.3. Rougissement de la conjonctive palpébrale (C) :
Vaisseaux normaux : 0.
Vaisseaux nettement plus injectés que la normale : 1.
Vaisseaux difficiles à distinguer individuellement :
- couleur rouge vif, diffuse : 2.
- couleur rouge foncé, diffuse : 3.
6.1.4. Additionner les trois notes et multiplier le total par 2 :
(A + B + C)"2 :
Maximum = 20.
6.2. Iris (D) :
Normal : 0.
Nettement plus plissé que la normale, congestion, gonflement, iris réagissant encore à la lumière, même lentement (une ou plusieurs de ces caractéristiques) : 1.
Pas de réaction à la lumière, hémorragie, destruction importante (une ou plusieurs de ces caractéristiques) : 2.
6.2.1. Multiplier la note obtenue D par 5 : D x 5 :
Maximum = 10.
6.3. Cornée :
Ne tenir compte que de la zone présentant le degré de lésion le plus élevé.
6.3.1. Degré d'opacification cornéenne (E) :
Aucune modification visible à l'examen direct (perte de brillant ou de poli) ou après instillation de fluorescéine : 0.
Présence de zones translucides ( diffuses ou disséminées), détails de l'iris clairement visibles : 1.
Présence d'une zone translucide facilement identifiable, détails de l'iris légèrement masqués : 2.
Présence d'une zone opalescente, aucun détail de l'iris visible, contour de la pupille à peine discernable : 3.
Présence d'une opacité cornéenne totale rendant l'iris et la pupille invisibles : 4.
6.3.2. Surface d'opacité (F) :
Un quart (ou moins mais non nulle) : 1.
Entre le quart et la moitié : 2.
Entre la moitié et les trois quarts : 3.
Des trois quarts à toute la surface : 4.
6.3.3. Faire le produit des deux notes et le multiplier par 5 :
E x F x 5 :
Maximum = 80.
VII. - Détermination des indices d'irritation oculaire.
7.1. Additionner pour chaque lapin les notes obtenues, à chaque temps d'observation. On obtient ainsi les indices d'irritation oculaire individuels : I.O.I.
7.2. Faire à chaque temps la moyenne des I.O.I. des trois lapins. On obtient ainsi l'indice d'irritation oculaire moyen : I.O.
7.3. Noter parmi les I.O. celui qui a la valeur la plus élevée. On obtient ainsi l'indice d'irritation oculaire maximum : I.O.Max. Le temps d'apparition de celui-ci sera précisé au rapport d'essai.
VIII. - Expression des résultats.
L'appréciation du produit examiné sera faite en fonction de l'indice d'irritation oculaire maximum mentionné au point VII, selon le tableau suivant :
I.O.max. et appréciation :
Inférieur ou égal à 15 : Faiblement irritant.
Supérieur à 15 et, inférieur ou égal à 30 : Moyennement irritant.
Supérieur à 30 et, inférieur ou égal à 50 : Irritant.
Supérieur à 50 : Très irritant.
IX. - Rapport d'essai.
Le rapport d'essai doit comporter toutes les indications prévues par les règles de bonnes pratiques de laboratoire.
Dans ses conclusions l'expérimentateur tiendra compte de toutes les observations et des résultats des examens, une attention particulière étant portée à la réversibilité des effets.
En cas d'impossibilité absolue d'utiliser la méthodologie décrite, l'expérimentateur devra mentionner avec précision et justifier les modifications apportées.