Arrêté du 2 septembre 1983 relatif aux méthodes officielles d'analyses relatives à la détection des antibiotiques et des sulfamides dans les laits destinés à l'alimentation humaine ou animale

Sur l'arrêté

Entrée en vigueur : 6 octobre 1983
Dernière modification : 6 octobre 1983

Commentaire0

Aucun commentaire indexé par Doctrine ne cite cette loi

Décision0

Aucune décision indexée sur Doctrine ne cite cette loi.

Document parlementaire0

Doctrine propose ici les documents parlementaires sur les articles modifiés par les lois à partir de la XVe législature (2017).

Versions du texte

Article 1
Les laboratoires chargés de concourir à l'application de la réglementation relative à la répression des fraudes sont tenus d'employer, pour la détection des antibiotiques et des sulfamides dans les laits destinés à l'alimentation humaine ou animale, les méthodes décrites en annexe.
Annexes :
Méthodes officielles pour la détection des antibiotiques et des sulfamides dans les laits destinés à l'alimentation humaine ou animale. :
Article Annexe
1. Objet et domaine d'application.
Les présentes méthodes ont pour objet la mise en évidence des antibiotiques et des sulfamides, elles ne visent pas à déterminer leur identité.
Elles sont applicables au lait cru, au lait traité thermiquement, au lait partiellement ou totalement déshydraté destinés à la consommation humaine ou animale, sous réserve de cas particuliers signalés au paragraphe mode opératoire.
Selon le type de lait à examiner, en cas de nécessité, les échantillons doivent être conservés au voisinage de 0 degré C jusqu'au lendemain au plus tard, ou à l'état congelé à une température inférieure ou égale à - 25 degrés C lorsque l'examen doit être reporté de plusieurs jours.
2. Définition.
Les méthodes présentement décrites permettent à l'aide de micro-organismes sensibles la détection de résidus appartenant à deux groupes de produits utilisés en thérapeutique vétérinaire :
- les antibiotiques, tels que pénicillines, tétracyclines, aminosides, macrolides et chloramphénicol ;
- les sulfamides.
3. Principe.
La détection des antibiotiques et des sulfamides nécessite l'application successive de deux types de méthodes.
3.1. Méthode d'acidification.
Ensemencement d'une souche de Streptococcus thermophilus dans l'échantillon de lait préalablement chauffé et additionné d'extrait de levure, d'un indicateur de pH et de triméthoprime.
Après incubation à 45 degrés C, la production d'acide est comparée à celle d'une culture témoin préparée à partir d'un lait exempt d'antibiotique.
En présence d'antibiotiques ou de sulfamides, la production d'acide est ralentie ou complètement inhibée.
L'échantillon de lait positif ou douteux doit être soumis à des épreuves de confirmation.
3.2. Méthodes de confirmation.
Elles impliquent la mise en oeuvre de techniques de diffusion en gélose, qui comportent :
L'ensemencement d'un micro-organisme sensible aux antibiotiques, aux sulfamides ou aux deux à la fois dans un milieu nutritif solide qui est coulé dans une boîte de Petri ;
Le dépôt d'un disque de papier filtre imprégné de lait à la surface du milieu ensemencé suivi d'une incubation à la température optimale de l'espèce bactérienne utilisée.
Les antibiotiques et les sulfamides éventuellement présents inhibent la croissance de l'organisme test ; il en résulte la formation d'une zone transparente autour du disque.
Les méthodes de confirmation requièrent l'utilisation des trois espèces suivantes : Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis et Bacillus megaterium.
L'addition de triméthoprime, lors de la réalisation de la méthode d'acidification et de la méthode de diffusion à l'aide de Bacillus megaterium, permet la détection des sulfamides dans le lait, cela grâce à l'action synergique du triméthoprime et des sulfamides.
Article Annexe
4. Milieux de culture, diluants et réactifs.
4. 1. Composants de base.
Pour améliorer la reproductibilité des résultats il est recommandé d'utiliser pour la préparation des milieux de culture des composants de base déshydratés ou des milieux complets déshydratés.
Les produits chimiques utilisés doivent être de qualité analytique.
L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou déminéralisée exempte de substances pouvant inhiber la croissance des micro-organismes dans les conditions de l'essai.
La mesure de pH doit être effectuée au pH-mètre à 25 degrés C ou après correction de la température.
Si les milieux et le diluant ne sont pas utilisés extemporanément, ils doivent être conservés à l'obscurité entre 0 et + 5 degrés C dans des conditions évitant toute modification de leur composition pendant un mois au maximum ou en respectant les prescriptions indiquées.
4. 2. Méthode d'acidification.
4. 2. 1. Lait écrémé reconstitué.
Composition :
Lait en poudre écrémé séché par atomisation (" spray ") exempt d'antibiotiques ou autres substances inhibitrices : 100 g
Eau : 1000 ml
Préparation :
Dissoudre la poudre de lait dans l'eau à 45-50 degrés C.
Répartir à raison de 12 ml dans des tubes de 18 x 180 mm (5. 13) avec bouchon à vis.
Stériliser à l'autoclave à 115 plus ou moins 1 degré C pendant 20 minutes.
4. 2. 2. Solution d'extrait de levure.
Composition :
Extrait de levure déshydraté : 10 g
Eau : 100 ml
Préparation :
Dissoudre l'extrait de levure dans l'eau.
Répartir à raison de 50 ml dans des flacons (5. 8.). Boucher.
Stériliser à l'autoclave à 121 plus ou moins 1 degré C pendant 20 minutes.
4. 2. 3. Solution de pourpre de bromocrésol.
Composition :
Pourpre de bromocrésol : 250 mg
Eau : 100 ml
Préparation :
Dissoudre le pourpre de bromocrésol dans l'eau.
Répartir à raison de 50 ml dans des flacons (5. 8). Boucher.
Stériliser à l'autoclave à 121 plus ou moins 1 degré C pendant 20 minutes.
4. 2. 4. Solution de triméthoprime.
Composition :
Triméthoprime : 100 mg
Acide acétique, solution à 5 % v / v : 10 ml
Eau q. s. p. : 1000 ml
Préparation :
Introduire le triméthoprime dans une fiole jaugée de 1000 ml (5. 12), faire dissoudre dans l'acide acétique, compléter avec de l'eau.
Cette solution est conservée au réfrigérateur (0 à 5 degrés C) et peut être utilisée pendant deux semaines au maximum.
Le triméthoprime est disponible au Laboratoire central d'hygiène alimentaire, 43, rue de Dantzig, 75015 Paris.
4. 3. Méthodes de confirmation.
4. 3. 1. Technique de diffusion à l'aide de Bacillus stearothermophilus.
4. 3. 1. 1. Bouillon nutritif.
Composition :
Peptone pancréatique de caséine (tryptone) : 20 g
Extrait de levure déshydraté : 10 g
Glucose : 0, 5 g
Eau : 1000 ml
Préparation :
Dissoudre les ingrédients dans l'eau à 45-50 degrés C.
Ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation il soit de 7, 0 plus ou moins 0, 1 à 25 degrés C.
Répartir à raison de 15 ml dans des tubes de 18 x 180 mm (5. 13). Boucher.
Stériliser à l'autoclave à 121 plus ou moins 1 degré C pendant quinze minutes.
Au moment de l'emploi, répartir aseptiquement le bouillon à raison de 10 ml par fiole (5. 11) stérile.
4. 3. 1. 2. Milieu pour les cultures de réserve.
Composition :
Preptone pepsique de viande : 5 g
Extrait de levure déshydraté : 2 g
Extrait de viande déshydraté : 1 g
Chlorure de sodium : 5 g
Agar-agar en poudre (selon les propriétés gélifiantes) 12 à 18 g
Eau : 1000 ml
Préparation :
Dissoudre les ingrédients dans l'eau en portant à l'ébullition.
Ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation il soit de 7, 4 plus ou moins 0, 1 à 25 degrés C.
Répartir à raison de 10 ml dans des tubes de 16 x 160 mm (5. 13). Boucher.
Stériliser à l'autoclave à 121 plus ou moins 1 degré C pendant quinze minutes.
Après stérilisation, laisser refroidir en position inclinée de façon à obtenir une pente d'environ 10 cm.
4. 3. 1. 3. Milieu pour l'épreuve de diffusion.
Composition :
Peptone pancréatique de caséine (tryptone) : 5 g
Extrait de levure déshydraté : 2, 5 g
Glucose : 1 g
Agar-agar en poudre (selon les propriétés gélifiantes) 12 à 18 g
Eau : 1 000 ml
Préparation :
Dissoudre les ingrédients dans l'eau en portant à l'ébullition.
Ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation il soit de 7, 0 plus ou moins 0, 1 à 25 degrés C.
Répartir à raison de 100 ml dans des flacons (5. 8). Boucher.
Stériliser à l'autoclave à 121 plus ou moins 1 degré C pendant quinze minutes.
4. 3. 2. Technique de diffusion à l'aide de Bacillus subtilis.
4. 3. 2. 1. Gélose n° 11 de Grove et Randall.
Composition :
Peptone pepsique de viande : 6 g
Peptone pancréatique de caséine (tryptone) : 4 g
Extrait de levure déshydraté : 3 g
Extrait de viande déshydraté : 1, 5 g
Glucose : 1 g
Agar-agar en poudre (selon les propriétés gélifiantes) 12 à 18 g
Eau : 1000 ml
Préparation :
Dissoudre les ingrédients dans l'eau en portant à l'ébullition.
Ajuster le pH, de sorte qu'après stérilisation il soit de 7, 9 plus ou moins 0, 1 à 25 degrés C.
Répartir à raison de 100 ml dans des flacons (5. 8). Boucher.
Stériliser à l'autoclave à 121 plus ou moins 1 degré C pendant quinze minutes.
4. 3. 3. Technique de diffusion à l'aide de Bacillus megaterium.
4. 3. 3. 1. Solution tampon.
Composition :
Dihydrogénophosphate de potassium (KH2 PO4) : 34 g
Eau : 500 ml
Préparation :
Introduire le dihydrogénophosphate de potassium dans une fiole jaugée de 1000 ml (5. 12) et faire dissoudre dans l'eau.
Ajuster le pH à 7, 2 à l'aide d'une solution d'hydroxyde de sodium 1 Mol / litre compléter à 1 litre avec de l'eau.
Répartir à raison de 100 ml dans des flacons (5. 8). Boucher.
Stériliser à l'autoclave à 121 plus ou moins 1 degré C pendant quinze minutes.
Au moment de l'emploi, introduire 1, 25 ml de ce tampon dans un flacon (5. 9) stérile et diluer avec de l'eau stérile afin d'obtenir 1 litre de solution tampon diluée.
4. 3. 3. 2. Diluant, solution tryptone-sel.
Composition :
Peptone pancréatique de caséine (tryptone) : 1 g
Chlorure de sodium : 8, 5 g
Eau : 1000 ml
Préparation :
Dissoudre les ingrédients dans l'eau à 45-50 degrés C.
Ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation il soit de 7, 0 plus ou moins 0, 1 à 25 degrés C.
Répartir à raison de 100 ml dans les flacons (5. 8). Boucher.
Stériliser à l'autoclave à 121 plus ou moins 1 degré C pendant quinze minutes.
Au moment de l'emploi, distribuer aseptiquement le diluant à raison de 9 ml dans des tubes de 20 x 200 mm (5. 13) stériles.
4. 3. 3. 3. Milieu de Mueller-Hinton.
Utiliser le milieu déshydraté Difco 0252 ou tout autre milieu donnant des résultats identiques.
Composition :
Hydrolysat de caséine : 17, 5 g
Macération de viande de boeuf : 300 g
Amidon : 1, 5 g
Agar-agar en poudre : 17 g
Eau q. s. p. : 1000 g
Préparation :
Dissoudre le milieu complet déshydraté dans l'eau en suivant les prescriptions du fabricant.
Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation il soit de 7, 4 plus ou moins 0, 1 à 25 degrés C.
Réparti à raison de 10 ml dans des tubes de 16 x 160 mm (5. 13) et de 100 ml dans des flacons (5. 8). Boucher.
Stériliser à l'autoclave à 121 plus ou moins 1 degré C pendant quinze minutes.
Après stérilisation, laisser refroidir les tubes en position inclinée de façon à obtenir une pente d'environ 10 cm.
4. 3. 3. 4. Milieu à 0, 01 micron de ml de triméthoprime, pour l'épreuve de diffusion.
Avant de répartir le milieu 4. 3. 3. 3 ajouter par litre :
1 ml de la solution de triméthoprime (4. 2. 4) diluée au 1 / 10 au moment de l'emploi.
Mélanger soigneusement.
Répartir à raison de 100 ml dans des flacons (5. 8). Boucher.
Stériliser à l'autoclave à 121 plus ou moins 1 degré C pendant quinze minutes.
Conserver au réfrigérateur 0 à + 5 degrés C pendant un mois au maximum.
4. 3. 3. 5. Milieu de sporulation.
Composition :
Peptone pepsique de viande : 3 g
Peptone pancréatique de caséine (tryptone) : 2, 5 g
Extrait de levure déshydraté : 4 g
Extrait de viande déshydraté : 2, 5 g
Monohydrogenophosphate de potassium (K2HPO4) : 2 g
Sulfate de manganèse (MnSO4H2O) : 10 mg
Agar-agar en poudre (selon les propriétés gélifiantes) 12 à 18 g
Eau : 1000 ml
Préparation :
Dissoudre les ingrédients dans l'eau en portant à l'ébullition.
Ajuster le pH de sorte qu'après stérilisation il soit de 8, 0 plus ou moins 0, 1 à 25 degrés C.
Répartir à raison de 250 ml dans des fioles de Roux (5. 10). Boucher.
Stériliser à l'autoclave à 121 plus ou moins 1 degré C pendant quinze minutes.
Après stérilisation, laisser refroidir les fioles (5. 10) en position horizontale.