Article Annexe de l'Arrêté du 2 septembre 1983 relatif aux méthodes officielles d'analyses relatives à la détection des antibiotiques et des sulfamides dans les laits destinés à l'alimentation humaine ou animale

1. Objet et domaine d'application.
Les présentes méthodes ont pour objet la mise en évidence des antibiotiques et des sulfamides, elles ne visent pas à déterminer leur identité.
Elles sont applicables au lait cru, au lait traité thermiquement, au lait partiellement ou totalement déshydraté destinés à la consommation humaine ou animale, sous réserve de cas particuliers signalés au paragraphe mode opératoire.
Selon le type de lait à examiner, en cas de nécessité, les échantillons doivent être conservés au voisinage de 0 degré C jusqu'au lendemain au plus tard, ou à l'état congelé à une température inférieure ou égale à - 25 degrés C lorsque l'examen doit être reporté de plusieurs jours.
2. Définition.
Les méthodes présentement décrites permettent à l'aide de micro-organismes sensibles la détection de résidus appartenant à deux groupes de produits utilisés en thérapeutique vétérinaire :
- les antibiotiques, tels que pénicillines, tétracyclines, aminosides, macrolides et chloramphénicol ;
- les sulfamides.
3. Principe.
La détection des antibiotiques et des sulfamides nécessite l'application successive de deux types de méthodes.
3.1. Méthode d'acidification.
Ensemencement d'une souche de Streptococcus thermophilus dans l'échantillon de lait préalablement chauffé et additionné d'extrait de levure, d'un indicateur de pH et de triméthoprime.
Après incubation à 45 degrés C, la production d'acide est comparée à celle d'une culture témoin préparée à partir d'un lait exempt d'antibiotique.
En présence d'antibiotiques ou de sulfamides, la production d'acide est ralentie ou complètement inhibée.
L'échantillon de lait positif ou douteux doit être soumis à des épreuves de confirmation.
3.2. Méthodes de confirmation.
Elles impliquent la mise en oeuvre de techniques de diffusion en gélose, qui comportent :
L'ensemencement d'un micro-organisme sensible aux antibiotiques, aux sulfamides ou aux deux à la fois dans un milieu nutritif solide qui est coulé dans une boîte de Petri ;
Le dépôt d'un disque de papier filtre imprégné de lait à la surface du milieu ensemencé suivi d'une incubation à la température optimale de l'espèce bactérienne utilisée.
Les antibiotiques et les sulfamides éventuellement présents inhibent la croissance de l'organisme test ; il en résulte la formation d'une zone transparente autour du disque.
Les méthodes de confirmation requièrent l'utilisation des trois espèces suivantes : Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis et Bacillus megaterium.
L'addition de triméthoprime, lors de la réalisation de la méthode d'acidification et de la méthode de diffusion à l'aide de Bacillus megaterium, permet la détection des sulfamides dans le lait, cela grâce à l'action synergique du triméthoprime et des sulfamides.